Mikroskopsystem mit Super Resolution-Technologie IXplore SpinSR
Das IXplore SpinSR-Mikroskopsystem wurde für schnelle 3D-Bildgebung mit hoher Auflösung und verlängerter Zelllebensfähigkeit in Zeitraffer-Experimenten entwickelt und erlaubt eine XY-Auflösung bis 120 nm ohne spezielle Markierungsverfahren.
IXplore IX83 SpinSR Mikroskopsysteme mit Super-Resolution-Technologie
Konfokale Super Resolution für alle Lebendzell-Präparate
Das IXplore SpinSR-Mikroskopsystem wurde für schnelle 3D-Bildgebung mit hoher Auflösung und verlängerter Zelllebensfähigkeit in Zeitraffer-Experimenten entwickelt und erlaubt eine XY-Auflösung bis 120 nm ohne spezielle Markierungsverfahren.
Hochauflösende Super Resolution
Die Konfokaltechnik und Olympus Super Resolution (OSR) ermöglichen bei konfokalen Bildern eine XY-Auflösung bis 120 nm.
*Bild: Stressfasern einer Hela-Zelle: Antikörperfärbung mit Phalloidin-Alexa488 (grün) für Aktin, Alexa 568 (rot) für die schwere Myosin-Kette.
Bildquelle: Tomonobu Watanabe, Ph.D. Division of Anatomy and Cell Biology, Faculty of Medicine, TOHOKU Medical and Pharmaceutical University
Geeignet für Lebendzellen
OSR-Algorithmen arbeiten in Echtzeit, um Verzögerungen durch Bildmittelwertbildung oder Bildrekonstruktion zu vermeiden, und liefern sofort Bilder mit hoher Auflösung, damit Sie schneller zu Ergebnissen kommen.
Dies ermöglicht einen Versuchsaufbau mit Superauflösung für Lebendzellexperimente, für die auch die ultraschnellen Bildgeschwindigkeiten und die Mehrkanal-Erfassung der Spinning Disk-Konfokalaufnahmen vorteilhaft sind.
EB3-Proteinbindung an der Spitze von Mikrotubuli in lebenden HeLa-Zellen. Die EB3-Proteine wurden mittels Transgenese mit GFP markiert.*1
Bildquelle: Kaoru Kato, PhD, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Biomedical Research Institute
Optimieren Sie Ihre Forschung
Integrieren Sie das Mikroskopsystem IXplore SpinSR einfach in bestehende Experiment- und Probenprotokolle; Sie können mit den gleichen Proben per Knopfdruck zwischen Weitwinkel-, Konfokal- und Superauflösung wechseln – das Mikroskop erledigt den Rest.
Mit den Bildanalysetools der cellSens Software können die Bilddaten weiter optimiert werden. Dank der effizienten Arbeitsabläufe der Software können Daten effektiv verwaltet und mit erweiterten Analysen neue Erkenntnisse gewonnen werden.
TruSight Dekonvolutionsalgorithmen sind so konzipiert, dass sie nahtlos mit OSR-Algorithmen zusammenarbeiten und so eine überflüssige Überarbeitung verhindern. Zusammen ergeben sie schärfere, klarere Bilder als beide Techniken allein.
Images on the left:
- Fullscreen
- 1xZoom
- 2xZoom
Machen Sie Details mit Super Resolution in Ihren Proben sichtbar
Bei der Beobachtung intrazellulärer Strukturen darf unscharfe Fluoreszenz nicht die echten Daten im Endbild verwischen. Das IXplore SpinSR-Mikroskopsystem verfügt über ein konfokales optisches System, das mit verschiedenen Objektiven (einschließlich Silikonöl-Objektiven) kombiniert werden kann und scharfe, superauflösende Bilder mit weniger Unschärfe auch bei dicken Proben ermöglicht. Darüber hinaus werden keine speziellen Fluorophore oder Imaging-Puffer benötigt, so dass Proben oder Präparationsprotokolle nicht geändert werden müssen, wenn auf Superauflösung gewechselt werden soll.
Zeitrafferaufnahme eines primären, mit EGFP markierten Mausneurons nach einer 2-wöchigen Co-Kultur mit Astrozyten Leicht zu erkennen ist der Unterschied zwischen unreifer Wirbelsäule (gelber Pfeil) und voll ausgebildeter Wirbelsäule (blauer Pfeil) und die morphologische Veränderung im Zeitverlauf. Das 3D-Bild wurde mit einer Belichtungszeit von 500 ms/Bild und einem Z-Schritt von 0,15 µm in 41 Schnitten aufgenommen. Die Bilder wurden innerhalb 1 Stunde alle 2 Minuten aufgenommen. 3D-Darstellung mit FV31S-DT.
Bildquelle: Yuji Ikegaya, PhD
Laboratory of Chemical Pharmacology, Graduate School of Pharmaceutical Sciences, The University of Tokyo
Reveal Your Data
Unsere TruSight Dekonvolution-Technologie kann in Kombination mit Superauflösung Bilder liefern, die klarer und schärfer sind als mit Dekonvolution allein. Durch iterative Dekonvolution mit 3D-Nebenbedingungen lassen sich Unschärfen in der Z-Achse entfernen und klarere dreidimensionale Bilder aufnehmen.
- Schnelle Bildverarbeitung mit der modernen TruSight-Dekonvolution
- TruSight-Dekonvolution ist kompatibel mit Super Resolution von Olympus
*Abbildung: Maus-Nierengewebe, gefärbt mit Alexa 488
Zweifarbige simultane Bildgebung
Das IXplore SpinSR-System kann mit zwei Kameras gleichzeitig eine schnelle zweifarbige superauflösende Lokalisierung erreichen. Dazu werden die vorhandenen Fluorophore und Laserlinien verwendet.
Mitotische Spindel in einer Metaphasenzelle*1
Fixierte HeLa-Zellen (aus einem humanen Cervix-Karzinom) mit angefärbten Mikrotubuli (α-Tubulin, rot) bzw. Kinetochoren (Hec1, grün) Mit DAPI gefärbte DNA (Chromosomen, blau). Chromosomen interagieren mit den Mikrotubuli der mitotischen Spindel über Kinetochore, die sich in der Zentromerregion der Chromosomen gebildet haben.
Bildquelle: Masanori Ikeda und Kozo Tanaka, Department of Molecular Oncology, Institute of Development, Aging and Cancer, Japan
Kernporenkomplex einer HeLa-Zelle
Nup153 (Alexa 488: grün), Nup62 (Alexa 555: rot)
Bildquelle: Hidetaka Kosako, Fujii Memorial Institute of Medical Sciences, Tokushima University, Japan
Literaturnachweise
S. Hayashi and Y. Okada, Ultrafast superresolution fluorescence imaging with spinning disk confocal microscope optics, Mol. Biol. Cell 26(9), 1743-1751 (2015).
S. Hayashi, Resolution doubling using confocal microscopy via analogy with structured illumination microscopy, Jpn. J. Appl. Phys. 55(8), 082501 (2016).
A. Nagasawa-Masuda and K. Terai, Yap/Taz transcriptional activity is essential for vascular regression via Ctgf expression and actin polymerization, PLoS ONE 12(4), e0174633 (2017).
H. Nakajima, et al., Flow-Dependent Endothelial YAP Regulation Contributes to Vessel Maintenance, Dev. Cell 40(6), 523-536.e6 (2017).
K. Tateishi, et al., Three-dimensional Organization of Layered Apical Cytoskeletal Networks Associated with Mouse Airway Tissue Development, Sci. Rep. 7, 43783 (2017).
E. Herawati, et al., Multiciliated cell basal bodies align in stereotypical patterns coordinated by the apical cytoskeleton, J. Cell Biol. 214(5) 571-586 (2016).
M.-T. Ke, et al., Super-Resolution Mapping of Neuronal Circuitry With an Index-Optimized Clearing Agent, Cell Rep. 14(11) 2718–2732 (2016).
M.-T. Ke, et al., “Super-Resolution Mapping of Neuronal Circuitry With an Index-Optimized Clearing Agent,” Cell Rep. 14(11) 2718–2732 (2016).
*1 Obwohl sie zu einer der wichtigsten Zelllinien in der medizinischen Forschung wurde, müssen wir unbedingt anerkennen, dass Henrietta Lacks Beitrag zur Wissenschaft ohne ihre Zustimmung erfolgte. Diese Ungerechtigkeit führte nicht nur zu wichtigen Entdeckungen in der Immunologie, bei Infektionskrankheiten und Krebs, sondern warf auch wichtige Diskussionen über Datenschutz, Ethik und Einwilligung in der Medizin auf. Um mehr über das Leben von Henrietta Lacks und ihren Beitrag zur modernen Medizin zu erfahren, klicken Sie hier. http://henriettalacksfoundation.org/
Angewandte Technologien
Das OSR-Prinzip
Die OSR-Technologie (Olympus Super Resolution) ermöglicht eine laterale Auflösung (X-Y-Ebene) von bis zu 120 nm. Es wurde speziell entwickelt, um die Vorteile von Daten mit hoher Raumfrequenz in konfokalen Bildern zu nutzen. Nach der Verarbeitung sind die endgültigen Bilder nicht nur durch die geringere Punktgröße schärfer, sondern bei sehr engen Strukturen auch besser aufgelöst.
Schnelle, superauflösende Bildgebung und großes Sichtfeld
Anstatt das gesamte Sichtfeld punktweise abzutasten, erstellt der empfindliche Bildsensor des SpinSR10 Momentaufnahmen des gesamten Probenbereichs in einem Schritt, beschleunigt so die Bildgebung und ermöglicht den Forschern, biologische Hochgeschwindigkeitsphänomene zu beobachten. Im Weitwinkel- und Konfokalmodus arbeitet das optische System des Mikroskops mit Feldnummer (FN) 18, um Bilder mit einem größeren Sichtfeld aufzunehmen. Mit zwei Kameras kann der Benutzer gleichzeitig zweifarbige Bilder mit Superauflösung aufnehmen.
Die Olympus Super Resolution-Technologie basiert auf einem konfokalen optischen System und kann durch die optische Schnittführung klare Bilder mit Superauflösung und reduziertem Hintergrund aufnehmen.
Anwendungsbilddaten mit freundlicher Genehmigung von: Hatsuho Kanoh, Tomoki Yano, Sachiko Tsukita
Graduate School of Frontier Biosciences and Graduate School of Medicine, Osaka University
Helles Bild von lebenden Zellen durch Spinning Disk
Das hochempfindliche Modell mit SoRa-Lochblendenscheibe erreicht dank der rotierenden Scheibe mit Mikrolinse in der konfokalen Lochblende eine hellere Bilderfassung mit hoher Auflösung. Jede konfokale Lochblende ermöglicht eine Bildaufnahme mit geringerer Laserleistung, so dass Photobleichung und Phototoxizität der Probe reduziert und gleichzeitig helle Bilder mit hoher Auflösung möglich werden.
In herkömmlichen konfokalen Mikroskopen ist die Bilderzeugung ein Produkt der Beleuchtungs-Punktspreizfunktion (PSF) und der Erkennungs-PFS. Betrachtet man die Bildformation an der Lochblende bei Position D von der optischen Achse aus, ist sie das Produkt aus Beleuchtungs-PSF und Erkennungs-PSF. Es ist erkennbar, dass Informationen von Position D/2 der optischen Achse zwar übertragen, aber nicht aufgelöst werden. Um dies zu korrigieren, wird eine Mikrolinse in die Lochblende eingesetzt; die einzelnen auf die Lochblende projizierten Fokuspunkte werden optisch der Mitte zugeordnet, so dass ein ideales Bild entsteht und Helligkeit und Auflösung verbessert werden. Bei diesem Verfahren ist die Auflösung nahezu so hoch wie bei einem idealen Konfokalmikroskop, bei dem die Lochblende unendlich klein ist.
Referenz: T. Azuma and T. Kei, Super-Resolution Spinning-Disk Confocal Microscopy Using Optical Photon Reassignment, Opt. Express 23, 15003-15011 (2015).
Gleichmäßige Ausleuchtung des gesamten Sichtfelds
Der Vergrößerungswechsler ist für das inverse Mikroskop IX83P2ZF vorgesehen und sichert eine gleichmäßige Ausleuchtung des gesamten Sichtfelds. Das telezentrische optische System des Vergrößerungswechslers maximiert die Leistung der Objektive und ermöglicht gleichzeitig eine nahtlose, motorisierte Umschaltung zwischen Konfokal- und Superauflösung.
Verbesserte Z-Auflösung
Unsere Silikonöl-Tauchobjektive sind für die Beobachtung von tiefem Gewebe konzipiert. Die Beobachtungstiefe wird durch Brechungsindex-Fehlanpassungen bedingte sphärische Aberration reduziert. Der Brechungsindex von Silikonöl (ne=1,40) entspricht fast dem von lebenden Zellen oder kultivierten Gewebeschnitten (ne=1,38) und ermöglicht eine superauflösende Abbildung innerer Zellstrukturen in einer Tiefe von mehreren zehn Mikrometern bei minimaler sphärischer Aberration.
Geringere sphärische Aberration
Der Fernkorrekturring dient zur Einstellung der Linsenposition innerhalb des Objektivs, um sphärische Aberrationen durch Brechungsindex-Fehlanpassung zu korrigieren, und verbessert damit Signal, Auflösung und Kontrast deutlich. Die IX3-RCC-Einheit funktioniert mit jedem UIS2-Objektiv mit Korrekturring.
Bildgebungsstabilität
In Kombination mit dem TurFocus Z-Drift-Kompensationssystem kann das IXplore SpinSR Mikroskopsystem hochpräzise, ausgerichtete und scharfe Zeitrafferaufnahmen erfassen.
Komplexe Experimente verwalten
Der Prozessmanager erleichtert es, Mehrfarben-, Z-Stapel- und Zeitrafferbilder zu erfassen. Mit dem programmierbaren grafischen Experimentmanager (GEM) kann der Anwender komplexere Automatisierungslösungen auf einer grafischen Benutzeroberfläche entwerfen, die eine Vielzahl von experimentellen Bildgebungsprotokollen und Geräteauslösungen unterstützt. Passen Sie Experimentierprotokolle flexibel an, damit diese jederzeit während des Bildgebungsprozesses leicht geändert werden können.
Anwendungsgalerie
Stereozilien und Kinocilien der inneren Haarzellen im Corti-Organ (Aktin: orange, Tubulin: grün)
Bildquelle: Hatsuho Kanoh1, Toru Kamitani1,2, Hirofumi Sakaguchi2, Sachiko Tsukita1
1Graduate School of Frontier Biosciences and Graduate School of Medicine, Osaka University
2Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, Kyoto Prefectural University of Medicine
Mitotisch gezüchtete Epithelzelle (Chromosom: blau, Tubulin: grün, ZO1: rot)
Bildquelle: Hatsuho Kanoh, Tomoki Yano, Sachiko Tsukita
Graduate School of Frontier Biosciences and Graduate School of Medicine, Osaka Universi
Mitochondrien, markiert durch GFP. Aufgenommen mit 30 fps, die einzelnen Mitochondrienbewegungen sind erkennbar.
Bilddaten mit freundlicher Genehmigung von: Tomonobu Watanabe, Ph.D., Graduate School of Engineering, Tohoku University
Mit GFP markierte Purkinje-Zellen XYZ-Bild mit konfokaler und superauflösender Darstellung in verschiedenen Z-Positionen. Superauflösende Bilder werden mit Z projiziert (10 Schnitte). 3D-Darstellung mit FV31S-DT.
Bilddaten mit freundlicher Genehmigung von: Yukari Takeo, Michisuke Yuzaki, PhD., Department of Physiology, School of Medicine, Keio University
Andere Systeme
Spezifikationen
| Mikroskopstativ | IX83P2ZF | ||
| Kontrastverfahren | Super Resolution | ✓ | |
| Konfokal | ✓ | ||
| Fluoreszenz (Anregung durch blaues/grünes Licht) | ✓ | ||
| Fluoreszenz (Anregung durch ultraviolettes Licht) | ✓ | ||
| Differenzieller Interferenzkontrast (DIC) | ✓ | ||
| Phasenkontrast | ✓ | ||
| Hellfeld | ✓ | ||
| Objektivrevolver | Motorisiert (6 Positionen) | ✓ | |
| Fokus | Motorgesteuert | ✓ | |
| Z-Drift-Kompensator | ✓ | ||
| Beobachtungstuben | Weitfeld (FN 22) | Schwenkbarer Binokulartubus | ✓ |
| Beleuchtung | Köhlersche Durchlichtbeleuchtung | LED-Lampe | ✓ |
| Halogenlampe 100 W | ✓ | ||
| Fluoreszenz-Beleuchtung | Quecksilberlampe 100 W | ✓ | |
| Lichtleiter-Beleuchtungsgerät | ✓ | ||
| Fluoreszenzmodul-Revolver | Motorisiert (8 Positionen) | ✓ | |
| Tisch | Motorgesteuert | Contact your local sales representative to hear about motorized stage options | |
| Mechanischer | Mechanischer Kreuztisch mit Rechtstrieb IX3-SVR | X: 114 mm, Y: 75 mm | |
| Mechanischer Kreuztisch mit kurzem Linkstrieb IX3-SVL | X: 114 mm, Y: 75 mm | ||
| Kondensor | Motorisiert | Universalkondensor | Arbeitsabstand 27 mm, NA 0,55, motorgesteuerte Blende und Polarisationsfilter |
| Manuell | Universalkondensor | NA 0,55/A.A. 27 mm | |
| Kondensor mit sehr großen Arbeitsabstand | NA 0,3/A.A. 73,3 mm | ||
| Konfokaler Scanner | CSU-W1 | ||
| Verarbeitung mit Superauflösung | Olympus super resolution (OSR) filter | ||
| Zubehör | Korrekturring-Fernsteuerung (IX3-RCC) Echtzeit-Controller (U-RTCE) Inkubationsgehäuse |
||
| Abmessungen (B × T × H) | 323 (B) x 475 (T) x 706 (H) mm (Mikroskopstativ IX83) | ||
| Gewicht | Etwa 47 kg (IX83P2ZF) | ||
Ressourcen
Anwendungshinweis
Insight
Videos
IX83 Inverted Microscope: Adding Oil to the Objective
IXplore SpinSR: Product Introduction
U-RTC/e: Perfect Timing and Intelligent Connections
SpinSR10: 3D time-lapse of neuron
SpinSR10: Introduction of Spinning Disk Unit
IX83 Inverted Microscope: Loading a Sample Slide on the Stage
Silikonöl-Immersionsobjektive: Für Lebendzellen-Bildgebung
SpinSR10: Mitotic cultured epithelial cell. (Chromosome: Blue, Tubulin: Green, ZO1: Red)
SpinSR10: GFP-EB3 at the tip of elongating microtubules in HeLa cell