Respuesta mitocondrial en los esferoides cancerígenos a los fármacos

Es posible visualizar el efecto de un agente de desacoplamiento mitocondrial en los esferoides.Este es un método prometedor para probar la toxicidad mitocondrial.

Objetivos

Las mitocondrias son orgánulos indispensables que suministran energía celular. La función de toxicidad mitocondrial es un factor importante que debe ser probado para los nuevos compuestos. En este estudio, se investigó la respuesta mitocondrial en los cultivos celulares 3D a los fármacos.

Preparación de muestras

Se añadió una suspensión celular HT-29 a una placa de 96 pocillos con base en U y se dejó incubar durante 96 horas para preparar los cultivos celulares 3D. Los esferoides se incubaron con MitoTracker® Red CMXRos (un colorante mitocondrial de membrana supeditado al potencial) y FCCP (un agente de desacoplamiento, 0-300 μM) durante 45 minutos, seguido de una fijación en formalina al 4 % y coloración nuclear con DAPI.

Conclusión Adquisición y análisis de imágenes

Se obtuvieron imágenes fluorescentes confocales de los esferoides mencionados anteriormente. La luminosidad media del núcleo y la mitocondria en una célula se estimaron superponiendo imágenes obtenidas cada 5 μM mediante el método de proyección de intensidad media. No se observó ningún efecto del FCCP en el núcleo [Figura 1 (a)], mientras que la luminosidad media de la mitocondria en una célula disminuyó con un aumento en la concentración de FCCP [Figuras 1 (b) y 2].

MitoTracker es una marca registrada de Molecular Probes, Inc.
Olympus es una marca registrada, y NoviSight and Insightful Analysis, Intelligent Answers son marcas comerciales de Olympus Corporation.

Productos usados para esta aplicación

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Software de análisis celular 3D

NoviSight

El software de análisis de células 3D NoviSight proporciona datos estadísticos para esferoides y objetos 3D a partir de experimentos con microplacas. Úselo para cuantificar la actividad celular 3D, capturar de forma más fácil los eventos celulares extraños, obtener recuentos celulares precisos, y mejorar la sensibilidad de la detección. El software NoviSight funciona con una amplia gama de técnicas de procesamiento de imágenes como el de escaneo puntual, bifotónico, confocal de disco giratorio y superresolución para células vivas.

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