Notas de aplicación
Monitorización remota del cultivo primario de células madre mesenquimales derivadas de la médula ósea
Esquema experimental
La célula madre mesenquimal derivada de la médula ósea es multipotente. Por lo tanto, es el objetivo de la investigación activa y de las aplicaciones clínicas como fuente de células para la medicina regenerativa. Cuando los fluidos de la médula ósea o las células de la médula ósea se siembran en placas de Petri, las células madre mesenquimales proliferan como células adherentes. Como resultado, las células madre mesenquimales pueden separarse de las células sanguíneas que están flotando. Aquí informamos de los resultados de la monitorización remota del cultivo primario de células madre mesenquimales utilizando el sistema de monitorización de incubación Olympus Provi™ CM20.
Procedimientos experimentales
Se sembraron células de médula ósea humana disponibles en el mercado en una placa de 24 pocillos (Sumitomo Bakelite, Cat. Nº. MS-80240) a una densidad de 950.000 células/0,5 mL/pocillo utilizando el Medio de Dulbecco Modificado de Iscove (IMDM) suplementado con 10% de suero fetal bovino (FBS) y 1% de Penicilina-Estreptomicina. Las células se fotografiaron con el sistema CM20 cada hora con autofoco. Dado que la proliferación de las células adherentes se observó en el día 4 de cultivo, se controlaron hasta 6 días después de intercambiar los medios.
Resultados
Justo después del sembrado
Día 4 (antes del intercambio de medios)
Día 4 (después del intercambio de medios)
Figura 1. Cultivo primario de células madre mesenquimales derivadas de la médula ósea. Las flechas indican las células madre mesenquimales derivadas de la médula ósea.
La mayoría de las células eran sanguíneas y no se observaron células madre mesenquimales inmediatamente después de la siembra. Sin embargo, el día 4 después de la siembra, aparecieron células madre mesenquimales con la morfología de un cuerpo fusiforme. Posteriormente, se cambió el medio para eliminar las células sanguíneas. El día 6 después de la siembra, las células madre mesenquimales proliferaron en un gran número de células.
Ventajas de utilizar las evaluaciones del sistema de seguimiento de la incubación
El cultivo primario de células madre mesenquimales derivadas de la médula ósea debe realizarse con la mayor suavidad posible hasta que aparezcan células adherentes. Deben evitarse en la medida de lo posible las sacudidas que puedan producirse durante la observación microscópica o el cambio de medio. Aquí demostramos que el sistema CM20 nos permitía monitorizar a distancia las células en incubación. Al utilizar el sistema CM20, acortamos el tiempo de la operación y pudimos proceder al resto del experimento en el momento adecuado.
Agradecimientos
Esta nota de aplicación se ha elaborada con la ayuda del siguiente investigador:
Takahiro Yamaguchi, PhD, Investigador Principal, ACEL, Inc.
Productos usados para esta aplicación
Sistema de monitorización de incubación
- Recopila automáticamente datos cuantitativos sobre la salud y la confluencia de sus cultivos
- Monitoriza, analiza y comparte la progresión de los cultivos de forma remota a partir de un PC o tableta
- Viene con la iluminación episcópica oblicua para una observación sin marcado
Sistema de monitorización de incubación
CM30
Monitorice, analice y comparta de forma remota la información sobre la salud, el recuento celular y la confluencia de sus cultivos celulares gracias a los datos cuantitativos fiables que proporciona el sistema de monitorización de incubación automática CM30. Este sistema permite una observación sin marcado, reduce los riesgos de daños en sus cultivos y normaliza el flujo de trabajo para su cultivo.
- Compilación automática de los datos cuantitativos sobre la salud y la confluencia de sus cultivos
- Monitorización del desarrollo de los cultivos de forma remota a partir de un/una PC o tableta
- Iluminación episcópica oblicua integrada para una observación sin necesidad de marcado