Note applicative
Il conteggio HPF resta uno degli strumenti fondamentali della microscopia clinica
Introduzione
Medici e patologi continuano ad affidarsi al conteggio di campi a forte ingrandimento (high-power field, HPF) per la sua rapidità, semplicità e utilità diagnostica. Questo metodo consente una valutazione rapida e standardizzata di cellule e strutture con un forte ingrandimento, a diretto supporto delle decisioni in ambito nefrologico, patologico e microbiologico.
Grazie alla minima attrezzatura richiesta e ai risultati immediati, il conteggio HPF è una parte integrante delle linee guida mediche e della pratica quotidiana del laboratorio, anche con l'evoluzione degli strumenti digitali.
Errori di conteggio ridotti al minimo
La maggior parte delle soglie diagnostiche sono basate su un indice di campo (FN) pari a 22 di un microscopio standard che, a un ingrandimento 400X, definisce un'area HPF di circa 0,237 mm².
Se si usa un microscopio con un FN diverso, l'area HPF varia. Tale variazione può portare sistematicamente a una sovrastima o a una sottostima, a meno che non venga utilizzato uno dei seguenti metodi correttivi:
- Applica un fattore di correzione - Regola matematicamente i conteggi osservati facendoli corrispondere all'area HPF standard (FN22).
- Adegua il numero degli HPF contati - Conta più o meno campi in modo che corrispondano all'equivalente area totale di HPF con FN22 standard.
Figura 1. L'indice di campo è indicato sull'oculare; in questo esempio FN26.5.
Tabella 1. Metodi di correzione in base all'indice di campo
Ottimizzazione della selezione dell'indice di campo
L'uso di un FN maggiore fornisce vantaggi pratici. Con un indice FN26.5, sono necessari solo 7 HPF per esaminare la stessa area di 10 HPF con FN22. Se, a questo punto, il risultato è già significativo dal punto di vista diagnostico, interrompere il conteggio. Se il risultato è borderline, passare a 10 HPF e applicare il fattore di correzione di interpolazione. Avendo valutato un'area del vetrino superiore del 31% rispetto a FN22, si ha un vantaggio statistico nella conferma della diagnosi.
Per un FN inferiore a 22, si consiglia di aumentare il numero di HPF contati secondo la Tabella 1, poiché il rischio di introdurre errori usando un fattore di correzione di estrapolazione è elevato, soprattutto in campioni con una distribuzione cellulare non omogenea.
Figura 2. Spessore sottile di cellule. Campo visivo con ingrandimento 20X per FN18, FN22 e FN26.5.
Conclusione
Nonostante la crescente presenza dell'imaging digitale e dell'analisi automatizzata nella microscopia clinica, il conteggio HPF resta una tecnica fondamentale per la sua affidabilità, accessibilità e rilevanza diagnostica. Comprendere l'impatto dell'indice di campo di un microscopio su un'area HPF è essenziale per mantenere l'accuratezza, soprattutto quando non si utilizza l'indice FN22 standard.
Applicando fattori di correzione o regolando il numero di campi contati, per i medici è possibile ottenere risultati coerenti e significativi. FN più grandi forniscono efficienza e vantaggi statistici, mentre FN più piccoli richiedono un compensazione attenta per evitare bias di campionamento. In ultima analisi, la conoscenza approfondita di queste regolazioni avvalora il conteggio HPF come strumento robusto e adattabile nei moderni flussi di lavoro diagnostici.