什么是数值孔径(NA),为什么它在显微镜物镜中很重要?
数值孔径是衡量物镜聚光和分辨细节能力的指标。NA值越高意味着镜头从样本中捕捉到的光线更多,并且能分辨更细微的结构,从而获得亮度更高、分辨率更高的图像。实际应用中,与NA值较低的镜头相比,NA值较大的物镜能呈现更细微的结构细节。
什么是色差,复消色差物镜如何纠正色差?
色差是一种对焦误差,表现为不同波长的光线无法汇聚至同一点,从而导致图像边缘出现彩色镶边现象。标准消色差物镜可对两种颜色(通常是红色和蓝色)进行校正,但仍会存在一些色差。复消色差物镜的设计可将三种颜色(红、绿、蓝)聚焦于同一焦点,色差几乎完全消除,从而获得色彩保真、清晰的图像。奥林巴斯平面复消色差镜头利用这种高度校正功能,即使在多色荧光实验中也能生成无色晕的图像。
消色差、萤石(半复消色差)和复消色差物镜之间有什么区别?
这些术语指的是物镜的光学校正水平。
- 消色差物镜是最常见的,可校正两种波长(通常为红色和蓝色)的色差和一种颜色的球面像差。
- 萤石(半消色差)物镜使用特殊玻璃(萤石)来实现更好的校正—通常能聚焦更多种颜色并改善球面像差,从而获得更高的对比度,NA值通常也高于消色差物镜。
- 复消色差物镜的校正能力最强,能聚焦三种或三种以上波长的光线,并校正多种颜色的球面像差。使用复消色差物镜获得的图像质量最好,数值孔径通常也最高。
简而言之,消色差物镜是常规检测的经济实用之选,萤石物镜实现了性能与成本的优化均衡,而复消色差物镜则为高精度应用场景提供卓越的分辨率与色彩保真度。
物镜名称中的“plan”是什么意思(如plan achromat或plan apochromat)?
Plan指的是平场物镜,意思是经过校正后,可在整个视场中产生平整、对焦的图像。如果没有这种校正,当中心对焦时,图像外围就会失焦。平场物镜可以消除视野曲率,因此视野的边缘也会更加清晰。例如,奥林巴斯MPLN系列(平场消色差)物镜的设计旨在为整个视场提供优化的平整度,以获得均匀的清晰度。这对于数字成像或宽视场目镜特别有用,因为使用非平面镜呈现出的图像边缘会很模糊。
什么是奥林巴斯MPLAPON和MPLAPON-Oil物镜?
奥林巴斯 MPLAPON 系列物镜包括专为在空气中使用而设计的高端平场复消色差物镜。这些干式物镜以其出色的色彩校正和分辨率而著称。这些物镜可以用于各种光谱范围的色差校正,并具备超高图像保真度,尤其适合明场、荧光或微分干涉观察模式下关键样品的精准观测。
MPLAPON-Oil 是该系列的油浸版本。它拥有同样先进的复消色差光学元件,但使用浸油技术实现了更高的数值孔径(数值孔径高达1.45),从而提高了分辨率。
当您需要较低的放大倍率,并且必须避免浸油时,请使用MPLAPON干式物镜。当您需要更高的分辨率和更强的亮度(通常在60X-100X放大倍率下),并且您的样品可以浸油时,请改用MPLAPON-Oil物镜。
与干式物镜相比,为什么使用油浸物镜可以提高物镜的分辨率?
与空气(1.0)相比,浸油具有更高的折射率(~1.51),这使得物镜能够捕捉更大角度的光线。以空气为介质时,理论上最大数值孔径为1.0(因为sin 90° = 1,n=1.0)。实际上,大多数高端干式物镜的最大数值孔径值都在0.95左右。如果在盖玻片和透镜之间使用油,折射率就会增加到1.51左右,从而使NA值达到1.3-1.4左右。较高的NA值可显著提高分辨率,因为透镜可收集更多来自细微结构的衍射光线。简而言之,与相同倍率的干式镜头相比,油浸镜头能分辨出更多细节(并产生亮度更高的图像)。
我可以在没有油的情况下使用油浸物镜吗?
不可以,在没有指定介质的情况下使用油浸物镜会降低性能。油浸物镜的设计原理是通过浸油(n≈1.51)填充盖玻片和透镜之间的间隙。如果使用空气(使用空气时,n=1.0)或水作为油浸物镜的介质,将导致光学器件产生球面像差并引发分辨率下降,这是因为介质折射率失配造成光线聚焦失准。制造商强烈建议不要将油性物镜与水或其他不匹配的介质一起使用。请务必使用指定的介质(根据物镜上的说明使用油、水或甘油)。否则,图像可能会模糊,无法达到物镜上标明的分辨率。
什么是显微镜物镜上的校正环?
校正环是某些高性能物镜上的一个可调节环,用于补偿盖玻片厚度偏差或浸入介质的差异。大多数物镜设计为适配标准0.17毫米盖玻片(1.5号盖玻片)。如果您的盖玻片不是这种厚度,或者您在折射率不同的其他液体中成像,就会产生球面像差和模糊。
而带有校正环的物镜可以通过调整镜头来适应这些变化—校正环通过机械方式移动内部镜片组来重新优化聚焦。通过调整校正环匹配到适宜的盖玻片厚度,可以防止由于盖玻片厚度不适合造成的图像模糊和像差。在实际操作中,只需转动校正环,直到图像(尤其在焦深较大区域)变得清晰为止。当盖玻片或样品厚度偏离标准0.17毫米标准值时,例如在底部较厚的活细胞室中,请使用校正环,以确保最佳成像质量。
为什么0.17毫米的盖玻片厚度对物镜如此重要?
高倍物镜的校准以盖玻片厚度为0.17毫米(1.5号盖玻片典型厚度)为宜。如果在物镜和样品之间使用明显较厚或较薄的玻璃,将导致光线无法按设计路径汇聚,从而引发球面像差乃至色差问题。这会导致图像模糊或失真。许多先进的物镜都有一个校正环来补偿这些像差。对于没有校正环的物镜,使用推荐的盖玻片厚度至关重要。使用标准的0.17毫米盖玻片有助于确保物镜的光学设计达到可靠性能,从而在全视场范围内产生清晰的图像和精准聚焦。
Evident/奥林巴斯物镜是否与其他品牌的显微镜兼容?
不保证兼容性,特别是对于现代无穷远校正系统。显微镜物镜通常使用通用螺纹(例如,许多奥林巴斯物镜都使用RMS螺纹),因此您可以将奥林巴斯物镜拧到其他品牌的物镜转盘上。但是,光学设计可能会有所不同:无限远校正物镜必须使用适当的镜筒透镜焦距和校正。例如,奥林巴斯的无限远物镜设计为适配180毫米的镜筒透镜,而另一个品牌可能使用200毫米的镜筒透镜;不同品牌之间混用会改变有效放大倍率并导致像差。此外,并非所有制造商的高端物镜都使用相同的螺纹间距或齐焦距离。总之,Evident或奥林巴斯物镜应在Evident/奥林巴斯显微镜(或为其专门设计的显微镜)上使用,以达到指定的性能。在调换不同制造商的物镜之前,请务必检查螺纹类型、镜筒长度和光学兼容性。
选择共焦显微镜物镜时应考虑哪些因素?
共焦显微镜要求高分辨率和高效聚光,因此首要考虑因素是高NA和出色的光学校正。选择高NA物镜(如60X/1.40油或60X/1.20水)能尽可能收集更多荧光信号和细节。使用共焦和其他高倍率技术时,在可能的情况下选择NA值最高的物镜,可获得更高的分辨率。共焦技术首选平面复消色差物镜,因为这种物镜具有出色的色度校正能力(在对多个荧光通道成像时非常重要)和相对较平的视场。例如,我们的奥林巴斯X Line系列物镜集成了NA提升、平整度提高和400-1000 nm宽谱段色差校正技术,特别适合用于多色共焦成像。同时要考虑工作距离和浸润介质。对于较厚的样本或活细胞,使用水或硅胶浸透透镜可减少折射率失配。对于载玻片上的固定样本,油浸透镜可提供更高的NA值和分辨率。
微分干涉对比(DIC)显微镜需要专用物镜吗?
DIC利用偏振光和诺马斯基/沃拉斯顿棱镜来产生对比度因此,用于DIC的物镜应基本无应变(即玻璃内部无双折射),以免干扰偏振光。与相衬物镜不同,DIC物镜通常没有内置的环状结构或特殊改装,主要要求是光学质量高,玻璃应变小。我们的平场物镜(如奥林巴斯UPlan或MPLN系列)设计为兼容DIC技术。许多物镜都贴有用于DIC的标签,或者只是因为内部应力极小而表现良好。过去,市面上销售的用于偏振光显微镜的物镜都标有“POL”或无应变,但许多现代奥林巴斯复消色差物镜和萤石物镜已具有足够低的应变,可用于DIC。因此,您不需要专门购买DIC物镜,而是可以使用已知可与DIC兼容的高质量平场消色差/萤石/复消色差物镜(但请务必使用与您物镜放大倍率匹配的正确DIC棱镜滑块组)。
建议使用哪些物镜进行活细胞成像(例如对活细胞或组织进行长时间延时显微镜观察)?
活细胞成像通常要用到专门的浸入式物镜,特别是水或硅胶浸入式透镜。这些物镜使用的浸入介质折射率更接近活细胞的折射率(水~1.33或硅油~1.40),在对含水试样成像时可最大限度地减少球面像差。
我们的硅胶浸入式物镜非常适合观察活细胞。硅胶浸入式物镜(如奥林巴斯UPLSAPO 60XS硅胶)具有高NA(约1.30)和相对较长的工作距离(约0.3毫米),可对厚标本成像。硅油的主要优点是在37 °C的温度下不会蒸发或变干,因此长期延时成像比浸水成像更稳定,维护成本更低。水浸物镜(NA~1.1-1.2)也可用于活细胞,尤其是短时间成像,因为它们与细胞介质天然匹配。然而,水会随着时间的推移而蒸发或导致焦距漂移。
对于长时间的活细胞实验,硅胶浸入式物镜通常是首选,它能在原生生物环境中提供高分辨率和高亮度,同时避免了干燥问题和球面像差。通常情况下,请务必确认您选择的物镜可与显微镜兼容,并且有适合长期使用的合适浸油或水介质输送系统。