FV3000を⽤いたマウス⼤動脈弁のマッピングと微細構造の観察

マクロ〜ミクロ観察機能でサンプルの全体像から組織の微細構造を観察

健康な成⼈の⼼臓の弁は、肺や全⾝へ⾎液を⼀⽅向に流すために重要な役割を担っています。しかし、⼤動脈弁の構造やその機能は環境ストレスに対して非常に脆弱です。⼤動脈⼆尖弁や⽯灰化、弁尖の劣化などの⼤動脈弁疾患の治療には、⼤動脈弁の細胞組成を解析し理解することが重要です。今回の実験では、共焦点レーザー顕微鏡FV3000のマクロ〜ミクロ観察機能を使用することにより、lineage tracingで同定された⾎管新⽣因⼦Tie2 陽性細胞の⼤動脈弁への寄与を、簡単で迅速に確認することに成功しました。

マクロ画像からミクロ画像まで簡単ワークフローで取得

今回の実験では、まずマクロ観察⽤低倍対物レンズPLAPON1.25Xを使⽤して⼤動脈弁切⽚の広範囲マクロ画像を取得しました。この画像をマップ画像としてソフトウェア上で表⽰した上で、ターゲットとなる細胞をマップ上でクリックするだけで位置出しし、⾼倍対物レンズを使⽤して⾼解像画像を取得しました。FV3000のマクロ〜ミクロ観察機能を使⽤することにより、マクロな全体像イメージからターゲット領域の微細構造の観察までを、サンプルに触れることなく、マウス操作だけで実⾏することができました。

動画：大動脈弁の構造と Tie2 発現パターン。Tie2 陽性細胞（EGFP、緑色）、非上皮細胞 (Tdtamato、赤色)。GFPは Tie2 陽性細胞を示す。

【撮影条件】
顕微鏡：FLUOVIEW FV3000（電動ステージ付き）
対物レンズ：1.25✕、10✕、40✕（PLAPON1.25X、UPLSAPO10X2、UPLSAPO40X2）

実験を可能にしたFV3000の技術

アプリケーションノート制作にご協力賜りました先生：

Dr. Wenli Fan, State Key Laboratory of Pharmaceutical Biotechnology, Department of Cardiology, Nanjing Drum Tower Hospital, The Affiliated Hospital of Nanjing University

関連論文

1. Feng, Q. et al. PDK1 regulates vascular remodeling and promotes epithelial-mesenchymal transition in cardiac development. Mol Cell Biol 30, 3711-3721, doi:10.1128/MCB.00420-10 (2010).
2. Di, R., Yang, Z., Xu, P. & Xu, Y. Silencing PDK1 limits hypoxia-induced pulmonary arterial hypertension in mice via the Akt/p70S6K signaling pathway. Exp Ther Med 18, 699-704, doi:10.3892/etm.2019.7627 (2019).