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뇌 조직의 4중 면역형광을 위한 낮은 색수차 대물렌즈 PLAPON60XOSC의 사용
뇌 조직의 4중 면역형광을 위한 낮은 색수차 대물렌즈 PLAPON60XOSC의 사용
서론
컨포칼 현미경 같은 광학 현미경으로 형광 이미지를 획득하기 전에 형광 염료를 사용하여 분자를 표지하는 것이 생물학적 조직 및 세포 내 분자의 편재화를 시각화하기 위한 가장 일반적 실험 방법으로 설정되어 있습니다.
하지만 현미경 대물렌즈의 색수차에 의한 색 분리로 인해 UV 및 근적외선 영역 내 세포 간 공존의 정확한 시각화를 위한 형광 염료의 사용이 어렵기 때문에 단일 표본에서는 다중 세포 간 공동 국소화의 정확한 시각화가 불가능하였습니다. Olympus의 저 색수차 대물렌즈 PLAPON60XOSC 렌즈는 UV 및 근적외선 영역에서도 색 분리가 거의 없이 형광 표지된 분자의 정확한 시각화를 제공합니다. 다음 사례에서는 4가지 유형의 형광 항체를 사용하여 단일 표본에서 형광 표지된 분자의 co-localization를 정확히 시각화하였습니다.
PLAPON60XOSC와 UPLSAPO60XO의 성능 비교
낮은 색수차 대물렌즈의 적용 - 뇌 조직의 4중 면역형광
| 뇌 조직의 4중 면역형광: 사진 (1) |
VIAAT 염색(Alexa Fluor405, 파란색) CB1 염색(Alexa Fluor488, 녹색) VGluT3 염색(Cy3, 빨간색) DGLα 염색(Alexa Fluor647, 흰색) |
카나비노이드 합성효소 DGLα(흰색)와 카나비노이드 수용체 CB1(녹색)은 쥐 기초 편도의 추체 세포(별표) 주위에 모여 있으며 고유한 함입 구조와 함입 시냅스(화살촉)를 형성하고 있습니다. 이러한 함입 시냅스는 소포 억제 아미노산 전달체(VIAAT)(파란색) 및 소포 글루탐산 전달체-3(VGluT3)(빨간색)을 발현합니다. 이는 억제 및 흥분 전달물질(각기 GABA와 글루타민 산)의 신경화학 속성을 가지고 있음을 나타냅니다. 이와 대조적으로 CB1 양성, VIAAT 양성 일반 유형의 억제 시냅스는 DGLα 클러스터가 그 주위에 형성되지 않은 경우 VGluT3을 발현하지 않았습니다. 이는 GABA 만의 신경화학 속성을 가지고 있음을 나타냅니다. 기준자: 5μm.
| 뇌 조직의 4중 면역형광: 사진 (2) |
VIAAT 염색(Alexa Fluor405, 파란색) CB1 염색(Alexa Fluor488, 녹색) VIP 염색(Cy3, 빨간색) DGLα 염색(Alexa Fluor647, 흰색) |
카나비노이드 수용체 CB1을 발현하고 추체 세포를 지배하는 두 가지 하위유형의 GABAergic 바구니세포가 있습니다. 하위유형 중 하나는 콜레시스토키닌(CCK)을 발현하고, 나머지는 혈관활성장펩티드(VIP)를 발현합니다. 이 4중 면역형광 염색은 CB1(녹색) 및 VIAAT(파란색)를 강하게 발현하는 -양성 신경 종말(빨간색) 주위에 DGLα(흰색)가 부족함을 보여줍니다. 이는 VIP-양성 신경 종말이 함입 시냅스의 형성과 관련이 없음을 나타냅니다. 기준자: 5μm.
이미징 시스템:
현미경: 생물 컨포칼 레이저 스캐닝 현미경 FV1200
대물렌즈: PLAPON60XOSC(60X, NA: 1.4)
다이오드 레이저: 405nm, 473nm, 559nm, 647nm
이미지 데이터 제공:
Masahiko Watanabe, M.D., Ph.D.
홋카이도 대학 의과대학원 해부학과
참고문헌:
J Neurosci. 2015 Mar 11;35(10):4215-28. doi: 10.1523/JNEUROSCI.4681-14.2015.
결론
사진 (1) 및 (2)에 표시된 바와 같이 다중 기능 분자와 세포 표지에 대한 4중 면역형광은 관련 기능 세포와 세포간 공간 거리의 종속적 또는 독립적 관계를 포함하여 세포 발현 및 세포이하 편재화에 대한 상세 정보를 제공할 수 있습니다. 색수차를 최소화할 수 있는 대물렌즈의 광학 성능을 비롯하여 검출 감도 및 현미경의 해상도는 면역형광의 목적을 달성하는 데 중요한 요소입니다.
이 애플리케이션에 사용되는 제품
FV5000
컨포컬 레이저 스캐닝 현미경
- 최첨단 혁신으로 실현된 탁월한 선명도, 속도, 신뢰성
- SilVIR™ 검출기는 광자 수준의 정밀 정량화, 뛰어난 감도, 그리고 극도의 신호 대 잡음비를 구현합니다.
- 탁월한 동적 범위가 전체 신호 스펙트럼을 포착하고 포화를 방지합니다.
- 하나의 플랫폼에서 고속 2K 공진 스캐닝과 고밀도 8K 갈보 스캐닝을 제공합니다.
- FLUOVIEW Smart™ 소프트웨어는 직관적인 제어와 AI 기반 자동화로 운영을 간소화합니다.
- TruResolution™ 자동 보정 칼라는 20개 이상의 대물렌즈에 대해 초점을 최적화합니다.
- 모듈식 설계는 최대 10개의 레이저 라인과 향후 다중 광자 업그레이드를 지원합니다.
- 레이저 파워 모니터(LPM)는 시간이 지나도 안정적인 조명과 재현 가능한 결과를 보장합니다.
FV5000MPE
다광자 레이저 스캐닝 현미경
- 소형 파이버 피그테일형 레이저는 산란 조직에서 깊고 정량적인 이미징을 가능하게 합니다.
- 밀리미터 깊이의 이미징을 위한 1개, 2개 또는 3개 선의 동시 MPE 레이저 여기
- SilVIR™, TruAI 및 TruSight™ 기술은 뛰어난 신호 대 잡음비와 선명도를 제공합니다.
- MPE 최적화 대물렌즈, TruResolution™ 자동 보정 collar, 그리고 자동 IR 레이저 정렬이 선명한 초점을 유지합니다.
- FV5000 시스템 업그레이드 또는 완전한 MPE 시스템으로 제공 가능합니다.
- 더 고급 다중 광자 응용 분야를 위한 완전히 조정 가능한 레이저 구성이 제공됩니다.
