应用笔记
使用 SLIDEVIEW™ VS200 虚拟扫描玻片系统的电动聚光镜调整样本对比度的优势
调整样品对比度
在光学显微镜中，孔径光阑可用于调整分辨率和对比度，因为改变孔径光阑开口的大小会改变投射到物镜中的照明光锥。正确调整聚光镜的孔径光阑对于获得高质量图像至关重要，因为其可以控制数值孔径、分辨率、景深和整体图像特征。
有两种方法可以控制照射样品的光强，即调节聚光镜孔径光阑或改变光源的功率。
下面是一个 H&E 染色小鼠肝脏样本的示例，该样本是在不同的聚光镜孔径光阑设置下，使用 VS200 虚拟扫描玻片系统上的 40x UPlanXAPO (NA 0.95) 物镜采集的。
这些图像表明，从左到右打开聚光镜孔径光阑会导致图像降低对比度，但会提高分辨率。*
VS200 系统配备了奥林巴斯 BX3-UCD8A (NA 0.9) 电动通用聚光镜，使光圈更易调节。使用VS200系统软件，可以将孔径光阑按照步进1%从关闭调整到完全打开。系统根据物镜的放大率和数值孔径 (NA) 自动调整。
作为标准值，VS200 系统使用的孔径光阑为物镜 NA 的 75%。物镜的 NA 越高，孔径光阑的开口越大。可以创建一种新的观察方法 (OM)，其中孔径光阑设置为物镜 NA 的50%。
如要执行该操作，请打开 VS200-ASW 软件并转到“设备自定义”。复制一份 BF 观察方法并对其重新命名。
最后，设置孔径光阑（BX3 孔径光栏）的值并保存观察方法。
注释：更改孔径光阑可能会影响重新命名的明场观察方法的阴影校正。
分别对这两种观察方法进行阴影校正。
应用程序示例：
Papanicolaou 测试（缩写为 Pap 测试）是一种宫颈癌筛查方法，用于检测宫颈中潜在的癌前病变和癌变过程。
人类 Pap 测试样品使用苏木精、橙黄 G6 和曙红进行染色。左侧的图像是使用 75% 的孔径光阑拍摄的，右侧的图像是使用 50% 的孔径光阑拍摄的。图像显示，较小的孔径光阑增强了样品的对比度，同时略微降低了分辨率。
使用 UPlanXAPO 20x，NA 为0.8的物镜扫描图像。使用标准孔径光阑设置（开口 75%）进行扫描，然后使用孔径光阑50% 进行扫描，以便在分辨率损失降到最低的情况下增强对比度。
结论：
VS200 系统的电动、可调孔径光阑使用户拥有更大的灵活性，可以充分利用样品，尤其是在样品非常微弱或低对比度的情况下。这可以应用于血液样品以及弱染色免疫组织化学 (IHC) 染色的载玻片。
* 有关孔径光阑及其使用方法的更多信息，请访问：
www.olympus-lifescience.com/en/microscope-resource/primer/java/kohler/contrast
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