应用笔记
FV3000共聚焦显微镜和X Line 40X油浸物镜对骨细胞相互作用进行高分辨率成像
现有研究表明，通过破骨细胞重吸收和成骨细胞新形成的平衡，骨骼得以不断重塑。然而，某些健康因素会打破这个平衡，导致出现如骨质疏松症等骨骼病变。若要深入地了解骨骼重塑机制，观察破骨细胞和成骨细胞之间的相互作用将非常关键。
在本项研究中，我们制备一枚小鼠胫骨切片（图1），并深入观察骨髓和皮质骨边界区域的破骨细胞和成骨细胞。通常情况下，我们会先用低放大倍率物镜获得较大视野并找到感兴趣区域，然后再使用高倍率油浸物镜以更高分辨率观察细节。但是这种方法不一定很可靠，因为切换物镜有可能会丢失感兴趣区域。
对此，我们只使用一枚40X油浸物镜观察标本，既在大视野下找到了感兴趣区域，又保证了极高的光学分辨率，大大提高工作效率，并保证了实验的可重复性。
图1：胫骨切片示例
使用X Line 40X油浸物镜（UPLXAPO40XO）对骨细胞相互作用进行高分辨率成像
我们先后观察了小鼠胫骨切片中骨髓和皮质骨之间的边界区域、成骨细胞（绿色）与血管内皮细胞（黄色）的接触部位（图2a中的*），以及成骨细胞与破骨细胞的相互作用部位（图2a中的＃）（红色）。40倍油浸物镜拍摄的大视野，可以帮助我们获得高清概览图像，并能迅速定位感兴趣区域（图2a方框部分）。
通过扫描光学变倍Zoom功能，我们在成骨细胞与破骨细胞相互作用位点获得了更高分辨率的图像（图2b）。使用X Line 物镜UPLXAPO40XO（NA1.40）与使用常规物镜UPLSAPO60XO（NA1.35）获得的图像质量几乎没有区别（图2c）。
图2：小鼠胫骨切片的荧光图像
使用UPLXAPO40XO物镜进行1倍Zoom获得的图像
使用UPLXAPO40XO物镜进行3.45倍Zoom获得的图像
使用UPLSAPO60XO物镜进行2.03倍Zoom获得的图像
成像条件
显微镜：FV3000共聚焦显微镜系统
物镜：UPLXAPO40XO（UPLSAPO60XO用作对照）
激光：488 nm （AlexaFluor488，绿色），561 nm（AlexaFluor568，红色），640 nm （AlexaFluor647，黄色）
FV3000共聚焦显微镜如何助力我们的实验
利用X Line物镜实现高画质成像
X Line物镜的高数值孔径（NA）能够收集更多信号，从而获得更明亮、分辨率更高的图像。
在低照度激发光下捕捉高信噪比（SNR）图像
Yukiko Kuroda博士的点评
在寻找破骨细胞和成骨细胞相互作用的位点时，先用低倍干镜获得大视野寻找感兴趣区域，再切换高倍率油镜拍摄高分辨率图片的方法并不高效，而且在成像过程中添加镜油也不太方便。如果只用UPLSAPO60XO物镜进行成像，由于视野小，要花很长时间才能找到感兴趣区域。
我们的研究表明，得益于与高倍物镜相当的数值孔径（NA），仅使用40X油浸物镜（UPLXAPO40XO）就能获得与UPLSAPO60XO物镜拍摄图像等效的高分辨率图像。最终我们仅需使用UPLXAPO40XO 这一只物镜就能够高效观察破骨细胞和成骨细胞之间的相互作用。
致谢
本应用指南的编写得到Yukiko Kuroda博士的协助，她是庆应义塾大学（Keio University）讲师，并负责本项研究中的图像。
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